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具體內(nèi)容:
通過CDR移植的方法進(jìn)行小鼠或者其他種屬來源的抗體的人源化改造。
以小鼠為例硅蹦,該方法主要包括以下幾個主要步驟:
1. 鼠抗序列分析及CDR區(qū)序列確認(rèn):對鼠抗序列進(jìn)行整體分析,確定CDR區(qū)裤翩,預(yù)測潛在翻譯后修飾位點(diǎn)芥炭。
2. 人框架區(qū)選擇:根據(jù)同源性比對結(jié)果,確認(rèn)最合適的人源框架區(qū)羽峰。
3. 回復(fù)突變位點(diǎn):根據(jù)抗體輕重鏈結(jié)合以及對CDR loop的影響確認(rèn)回復(fù)突變位點(diǎn)趟咆。
4. 基因合成及真核表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建:將人源化后的抗體氨基酸序列反向翻譯成堿基,并進(jìn)行密碼子優(yōu)化梅屉,然后構(gòu)建至真核表達(dá)質(zhì)粒中值纱。
5. 表達(dá)和純化:瞬轉(zhuǎn)至CHO或者HEK293中進(jìn)行表達(dá)并純化。
6. 親和力測定:通過Biacore評估移植后的人源化抗體的親和力坯汤。
CDR移植方法的優(yōu)勢在于保持了原始小鼠源抗體的抗原結(jié)合能力虐唠,同時減少了小鼠抗體的免疫原性和潛在的不良反應(yīng)。
流程及報(bào)價:
服務(wù)項(xiàng)目 | 具體內(nèi)容 | 時間 | 價格 | 結(jié)果 |
抗體的人源化設(shè)計(jì) | ? 鼠抗序列分析 ? 人germline的比對與選擇 ? CDR grafting ? 序列優(yōu)化 ? 確定回復(fù)突變位點(diǎn) | ~2-3天 | 面議 | 多條人源化序列 |
人源化抗體的重組表達(dá) | ? 密碼子優(yōu)化及基因合成 ? 真核表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建 ? 瞬轉(zhuǎn)表達(dá) ? 純化及QC | ~2周 | 面議 | 純化的人源化抗體 |
人源化抗體的活性鑒定 | ? 抗原結(jié)合活性及親和力檢測 | ~1周 | 面議 | 確定的人源化序列及報(bào)告 |
具體內(nèi)容:
通過CDR移植的方法進(jìn)行小鼠或者其他種屬來源的抗體的人源化改造疆偿。
以小鼠為例咱筛,該方法主要包括以下幾個主要步驟:
1. 鼠抗序列分析及CDR區(qū)序列確認(rèn):對鼠抗序列進(jìn)行整體分析,確定CDR區(qū)杆故,預(yù)測潛在翻譯后修飾位點(diǎn)迅箩。
2. 人框架區(qū)選擇:根據(jù)同源性比對結(jié)果,確認(rèn)最合適的人源框架區(qū)处铛。
3. 回復(fù)突變位點(diǎn):根據(jù)抗體輕重鏈結(jié)合以及對CDR loop的影響確認(rèn)回復(fù)突變位點(diǎn)饲趋。
4. 基因合成及真核表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建:將人源化后的抗體氨基酸序列反向翻譯成堿基,并進(jìn)行密碼子優(yōu)化撤蟆,然后構(gòu)建至真核表達(dá)質(zhì)粒中奕塑。
5. 表達(dá)和純化:瞬轉(zhuǎn)至CHO或者HEK293中進(jìn)行表達(dá)并純化。
6. 親和力測定:通過Biacore評估移植后的人源化抗體的親和力枫疆。
CDR移植方法的優(yōu)勢在于保持了原始小鼠源抗體的抗原結(jié)合能力爵川,同時減少了小鼠抗體的免疫原性和潛在的不良反應(yīng)。
流程及報(bào)價:
服務(wù)項(xiàng)目 | 具體內(nèi)容 | 時間 | 價格 | 結(jié)果 |
抗體的人源化設(shè)計(jì) | ? 鼠抗序列分析 ? 人germline的比對與選擇 ? CDR grafting ? 序列優(yōu)化 ? 確定回復(fù)突變位點(diǎn) | ~2-3天 | 面議 | 多條人源化序列 |
人源化抗體的重組表達(dá) | ? 密碼子優(yōu)化及基因合成 ? 真核表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建 ? 瞬轉(zhuǎn)表達(dá) ? 純化及QC | ~2周 | 面議 | 純化的人源化抗體 |
人源化抗體的活性鑒定 | ? 抗原結(jié)合活性及親和力檢測 | ~1周 | 面議 | 確定的人源化序列及報(bào)告 |
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